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化学发光免疫分析技术PPT课件

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化学发光免疫分析 陈仓医院检验科: 一、化学发光免疫技术的概念 二、化学发光免疫分析基本原理 三、化学发光免疫分析的类型 四、临床应用 五、发展与展望 一、化学发光免疫技术的概念 化学发光免疫技术:化学发光分析是根据化学反应产生的辐射光 的强度来确定物质含量的分析方法。化学发光免疫分析是将化学发光 系统与免疫反应相结合,用化学发光相关的物质标记抗体或抗原,与 待测的抗原或抗体反应后,经过分离游离态的化学发光标记物,加入 化学发光系统的其它相关物产生化学发光,进行抗原或抗体的定量或 定性检测。 化学发光免疫分析 (Chemiluminescence Immunoassay,CLIA) 是*十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析。它 具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污 染、仪器简单经济等优点。它是放射性免疫分析与普通酶免疫分析的 取代者,是免疫分析重要的发展方向。CLIA发展迅猛,已占各种免疫 分析的首位,是目前放射免疫分析和酶联免疫分析最佳的取代者。 是目前世界公认先进的标记免疫测定技术,化学发光 免疫分析技术具有高度的准确性和特异性,成为检验方法 中最为重要的技术之一。化学发光免疫分析技术作为疾病 诊断的主要手段已被广泛用于机体免疫功能、传染性疾病 、内分泌功能、肿瘤标志物、性激素、甲状腺功能等方面 的体外诊断实验中。 化学发光免疫分析的优势 ? 灵敏度高 ? 灵敏度高是化学发光免疫分析关键的优越性,其灵敏度可达 10-22 mol/L ( RIA 为 10 -12 mol/L )。化学发光免疫分析能够检出放射免疫 分析和酶联免疫分析等方法无法检出的物质,对疾病的早期诊断具有 十分重要的意义。 ? 发光强度在 4 ~ 6 个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显 色的酶免疫分析吸光度( OD 值)为 2.0 的范围相比,优势明显。虽 然 RIA 也有较宽的线性动力学范围,但放射性限制了其应用。 ? 宽的线性动力学范围 ? 光信号持续时间长 ? 辉光型的 CLIA 产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。简化了实 验操作及测量。 ? 绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂(或复合试剂)的一步模式 ? 分析方法简便快速 ? 结果稳定、误差小 ? 样品系直接自己发光,不需要任何光源照射,免除了各种可能因素(光源稳定性、光 散射、光波选择器等)给分析带来的影响,使分析结果灵敏稳定可靠。 ? 安全性好及使用期长 ? 免除了使用放射性物质。到目前为止,还未发现其危害性;试剂稳定,保存期可达一 年。 二、化学发光免疫分析基本原理 化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学 发光分析系统。免疫反应系统是将标记物质标记在抗原或 抗体上, 经过特异性免疫反应后,形成抗原2抗体复合物。 然后进行对标记物进行检测, 来测定待检物。化学发光分 析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧 化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到 稳定的基态时, 同时发射出光子, 利用发光信号测量仪器 光量子产率。 ? 化学发光免疫分析仪是通过检测患者血清内待测物质从而 对人体进行免疫分析的医学检验仪器。将定量的患者血清 和辣根过氧化物(HRP)加入到固相包被有抗体的白色不 透明微孔板中,血清中的待测分子与辣根过氧化物酶的结 合物和固相载体上的抗体特异性结合。分离洗涤未反应的 游离成分。然后,加入鲁米诺Luminol发光底液 ,利用化 学反应释放的自由能激发中间体,从基态回到激发态,能 量以光子的形式释放。此时,将微孔板置入分析仪内,通 过仪器内部的三维传动系统,依次由光子计数器读出各孔 的光子数。样品中的待测分子浓度根据标准品建立的数学 模型进行定量分析。最后,打印数据报告,以辅助临床诊 断。 三、化学发光免疫分析的类型 化学发光免疫分析法根据其标记物的不同可分为三大类, 即化直接化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化 学发光免疫分析法。 3.1 直接化学发光免疫分析 用吖啶酯直接标记抗体(抗原),与待测标本中相 应的抗原(抗体)发生免疫反应后,形成固相包被抗 体-待测抗原-吖啶酯标记抗体复合物,这时只需加 入氧化剂(H2O2)和NaOH使成碱性环境,吖啶 酯在不需要催化剂的情况下分解、发光 。 由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生的 光子能,这部分光的积分与待测抗原的量成正比,可从标准 曲线上计算出待测抗原的含量。 直接化学发光的机理 --- 夹心法 + + 磁微粒 抗体 被测抗原 带吖啶酯 标记物抗 体 (1) 加入H2O2 (pH<10) 冲洗后 (2) 加入碱 (pH>10) 发光 磁微粒技术 磁微粒模式图 特点 – 抗原和抗体结合与未结合 部分的易分离 Y 3.2、化学发光酶免疫分析 化学发光酶免疫分析(chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA)是用参与催化某一化学发光反应的酶 如辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗 体,在与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后,形成固 相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物,经洗涤后,加入底物 (发光剂),酶催化和分解底物发光,由光量子阅读系统接收,光 电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大,再把它们传送至 计算机数据处理系统,计算出测定物的浓度。 ㈠ 辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析 该分析系统采用辣根过氧化物酶(HRP)标 记抗体(或抗原),在与反应体系中的待测标 本和固相载体发生免疫反应后,形成固相包 被抗体-待测抗原-酶(HRP)标记抗体复合 物,这时加入鲁米诺发光剂、H2O2和化学发 光增强剂使产生化学发光。 辣根过氧化物酶标记化学发光免疫分析示意图 ㈡ 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析 该分析系统以碱性磷酸酶 标记抗体(或抗原), 在与反应体系中的待测



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